Шаблон экспрессии 10 киназ митогенно-активированных белков (MAPKK), закодированных в геноме.

A-Raf — это серин/треониновая протеинкиназа, которая принадлежит к семейству киназ RAF. A-Raf играет ключевую роль в различных физиологических и патологических процессах, включая регуляцию клеточного цикла, апоптоз, транспорт веществ и метаболизм, эмбриональное развитие, поддержание костной массы и прогрессию опухолей. По мере продвижения исследований механизмы функций гена A-Raf привлекают все большее внимание. С целью систематического обобщения его биологических функций данный обзор сосредоточен на влиянии A-Raf на клеточный цикл, апоптоз и пролиферацию клеток, его воздействии на транспорт клеточных веществ и метаболические процессы, его роли в развитии организма и поддержании костной массы, влиянии на прогрессию опухолей, эффекте генетических вариаций на функцию A-Raf и регуляции A-Raf факторами, действующими выше по цепи. Таким образом, данный обзор нацелен на предоставление нового взгляда для комплексного понимания функции A-Raf.

Метилирование ДНК традиционно рассматривается как стабильная эпигенетическая модификация. Однако все больше данных свидетельствует о том, что окислительный и генотоксический стресс могут вызывать изменения метилирования в специфических локусах, которые модифицируют транскрипционные ответы. Вклад такой динамической регуляции в экспрессию сердечных генов при ишемии/реперфузии миокарда (ИРИ) остается до конца непонятным. Это исследование проверило, связаны ли изменения метилирования в области промотора с ремоделированием коннексина 43 (Cx43) при ИРИ. Самцам мышей C57BL/6 был проведен глобальный гипотермический I/R с использованием модели сердца, перфузируемого по Лангендорфу, с предварительной обработкой или без нее с помощью ингибитора ДНК-метилтрансферазы 5-азацитидина (5-Аза, 3 мкг/г массы тела, в/к). Метилирование промотора было проанализировано с помощью BSP и MSP, в то время как обогащение Dnmt1 было оценено с помощью иммуноосаждения хроматина. Экспрессия и локализация Cx43 были изучены с помощью qRT-PCR, вестерн-блоттинга и иммуннофлуоресценции, а также электрофизиологических и гистологических анализов. ИРИ была ассоциирована с повышением уровня Dnmt1 и его обогащением в ядре, что сопровождалось изменениями метилирования в выбранных CpG сайтах в исследуемой области промотора и транскрипционной репрессией. Эти изменения совпали со снижением экспрессии Cx43, изменением субклеточной локализации, нарушением электрической проводимости и повышенной предрасположенностью к аритмиям. Предварительная обработка 5-Аза частично ослабила метилирование промотора и сохранила экспрессию и локализацию Cx43 в процессе последующей ИРИ. Эти результаты поддерживают связь между обогащением Dnmt1, изменением метилирования CpG промотора и ремоделированием Cx43 при реперфузионном стрессе, что предполагает, что метилирование, связанное с эпигенетической регуляцией, может участвовать в транскрипционных реакциях Gja1 при ИРИ. Необходимы дальнейшие временные и геноспецифические валидации, чтобы установить кинетику и причинную специфичность этого пути.

Тубулоинтерстициальный фиброз (ТФ) играет важную роль в ухудшении диабетического заболевания почек (ДЗП). Эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП) в трубчатых эпителиальных клетках (ТЭК) приводит к ТФ в процессе прогрессирования ДЗП. Гипоксически индуцируемый фактор-1α (HIF-1α; HIF1A) был описан как способствующий ЭМП и ТФ через индуцирование пути трансформирующего фактора роста-β1 (TGF-β1). В этом исследовании мы поставили цель изучить медиирующее действие ключевых генов в индуцированном HIF-1α ЭМП и ТФ при ДЗП. Данные профилирования экспрессии генов в тубулоинтерстициальной области от пациентов с ДЗП и здоровых контролей (ЗК) были получены из базы данных GEO, а для биоинформатического анализа использовались пакеты R; валидация биоинформатических данных проводилась на мышах db/db и линии проксимальных ТЭК (HK-2). В результате мы сосредоточились на катепсине S (CTSS). Функциональное обогащение указало, что HIF1A и CTSS совместно участвуют в активации воспалительных процессов, депозиции внеклеточного матрикса и клеточных взаимодействиях. Эксперименты подтвердили, что в моделях ДЗП HIF-1α может повышать уровень катепсина S, способствуя частичному переходу ЭМП и фибротическому ремоделированию в ТЭК, тем самым ухудшая диабетическое повреждение почек. В заключение, CTSS может выступать в качестве эффектора, внедренного HIF-1α, принимающего участие в регуляции связанного с частичным ЭМП фенотипического изменения и фибротического ремоделирования ТЭК в моделях диабетического заболевания почек.

Настоящее исследование направлено на изучение участия трансляционного фактора T-box 15 (TBX15) в иммунном уклонении клеток рака желудка (РЖ), а также молекулярных путей, регулирующих TBX15 как вверх, так и вниз по схемам регуляции. Были собраны образцы тканей РЖ и параканцерозных тканей для подтверждения экспрессии TBX15, матриксной металлопротеиназы 14 (MMP14) и метилтрансферазы-подобной 3 (METTL3) с использованием обратной транскрипционной количественной ПЦР и западного блоттинга. Создана система совместной культуры клеток РЖ, связанных с опухолевыми макрофагами (TAMs), и клеток CD8T из мышей с карциномой преджелудка (MFC). TBX15, MMP14 и METTL3 были высокоэкспрессированы в тканях РЖ. Проведены анализы Каплана-Мейера, и высокая экспрессия предсказывала плохой прогноз для пациентов с РЖ. Заглушение способствовало апоптозу клеток РЖ и ингибировало развитие опухолей, а также активность пролиферации, миграции и инвазии. TBX15 связывался с промотором с использованием ChIP-qPCR. Перепрограммирование смягчало уменьшение, вызванное заглушением. METTL3 нацеливает мРНК и регулирует уровень м6A. TBX15 ассоциирован с инфильтрацией макрофагов и клеток CD8T. В системе совместной культуры клеток РЖ-TAM и клеток MFC-CD8T перепрограммирование смягчало снижение M2 поляризации и активацию противоопухолевой активности клеток CD8T, вызванное заглушением. Однако перепрограммирование приводило к снижению поляризации макрофагов M1 и активности клеток CD8T, вызванных заглушением. Эти данные предполагают, что TBX15, связанный с плохим прогнозом у пациентов с РЖ, способствует иммунному уклонению в клетках РЖ. TBX15, регулируемый метилированием м6A, нацеливал промотор MMP14, тем самым регулируя экспрессию MMP14. Сигнальная ось METTL3/TBX15/MMP14 была вовлечена в развитие клеток РЖ, поляризацию макрофагов M2 и активацию противоопухолевой активности клеток CD8T. Эти результаты предоставляют фундаментальную экспериментальную основу для рассмотрения TBX15 как потенциальной терапевтической мишени для РЖ.

Жировая ткань имеет решающее значение для поддержания глюкозного и липидного гомеостаза у млекопитающих. Однако эпигеномные механизмы, лежащие в основе функции жировой ткани, остаются в значительной степени неясными. Здесь мы идентифицируем хистановый шаперон HIRA как эпигеномного регулятора функции жировой ткани. Наиболее специфичный нокаут HIRA у мышей приводит к снижению чувствительности к инсулину и сдерживанию расширения жировой ткани в условиях ожирения, индуцированного высокожировой диетой. Механистически HIRA необходима для экспрессии генов, кодирующих адипокин адипонектин, и генов липидного метаболизма в жировой ткани. Геномное картирование показывает, что HIRA связывается с промоторами и энхансерами генов липидного метаболизма в адипоцитах. Острая деградация HIRA с использованием системы dTAG, последующая за которой идет анализ новообразованной РНК (RNA-Seq) и ChIP-Seq, показывает, что хотя HIRA в значительной степени не является обязательной для активации энхансера и связывания коактиваторов, она способствует транскрипции целевых генов, облегчая высвобождение паузы РНК-полимеразы II и последующее удлинение, вероятно, независимо от депонирования H3.3. Наши результаты раскрывают механизм, посредством которого HIRA регулирует транскрипцию, и устанавливают критическую роль HIRA в чувствительности к инсулину и липидном метаболизме, предоставляя потенциальную терапевтическую мишень для ожирения и инсулиновой résistенции.

Для изучения эффектов Платикодина D (PD) на пролиферацию, миграцию и ангиогенез клеток эндотелия EA.hy926, стимулированных супернатантом из модели синовиальных клеток ревматоидного артрита (РА) (MH7A), данное исследование стремится предварительно выяснить его потенциальные механизмы. Клетки MH7A, стимулированные TNF-, были использованы в качестве модели клеток РА. Супернатант из этих клеток был собран и обозначен как кондиционированная среда (КС), которая затем использовалась для стимуляции клеток EA.hy926, тем самым создавая модель эндотелиальных клеток при РА; клетки EA.hy926 были трансдуцированы лентивирусом для суперэкспрессии или нокаута CD146; Экспериментальные группы включали: нормальная контрольная группа, модельная группа (группа с оптимальной стимуляцией КС), и группы лечения PD (PD при концентрациях 1.25, 2.5 и 5 мг/л); sh-CD146+КС, sh-NC+КС, sh-NC, lenti-CD146+КС, lenti-CD146-NC. Спасательный эксперимент включал следующие группы: КС, КС+PD группа, КС+lenti-CD146 группа и КС+lenti-CD146+PD группа лечения. Пролиферация клеток оценивалась с помощью анализа CCK-8; миграция клеток оценивалась через тест раневого заживления; ангиогенез определялся с помощью тестов формирования трубочек; уровень экспрессии CD146 измерялся методом вестерн-блоттинга. В сравнении с нормальной группой, стимуляция КС значительно увеличивала пролиферацию эндотелиальных клеток (<0.01). Однако после 24 часов обработки PD наблюдалось заметное снижение пролиферации клеток (<0.05). Кроме того, стимуляция КС улучшала способность клеток к миграции по сравнению с нормальной группой; это улучшение было значительно уменьшено после лечения PD (<0.01). Более того, способность к образованию трубочек была значительно увеличена при стимуляции КС по сравнению с нормальной группой, но показала значительное подавление после 24 часов лечения PD (<0.0001). Выражение CD146 было значительно увеличено в модельной группе по сравнению с нормальной группой и затем снизилось после лечения PD (<0.01), и зависело от дозы. В спасательном эксперименте, по сравнению с группой лечения PD (КС+PD 5 мг/л), пролиферация, миграция и способность образовывать трубочки клеток в группе суперэкспрессии CD146+группа лечения PD (КС+lenti-CD146+PD 5 мг/л) были значительно увеличены (<0.0001,<0.05,<0.001). Интересно, что по сравнению с группой суперэкспрессии (КС+lenti-CD146), эти способности в группе суперэкспрессии+группа лечения PD (КС+lenti-CD146+PD 5 мг/л) оставались значительно подавленными (<0.0001,<0.0001,<0.05). В этом исследовании мы также обнаружили, что CD146 проявляет значительные пронгиогенные, промиграционные и прополиферативные эффекты в клетках EA.hy926. В то же время, PD показал значительное подавление ангиогенеза, пролиферации и миграции клеток EA.hy926 в зависимости от дозы, и понизил уровень экспрессии CD146 в зависимости от дозы. Суперэкспрессия CD146 частично ослабила антиангиогенный эффект PD, но PD все еще проявлял сильную антиангиогенную активность в клетках с суперэкспрессией CD146, что указывает на то, что PD частично действует через регуляцию CD146 и, возможно, другие пути, отражая его многогранную природу. Это исследование впервые связывает антиангиогенный эффект PD с CD146, открывая перспективное направление терапии для РА.