Предклиническая характеристика HEC116094, орального ингибитора полимеразы вируса гриппа А, субъединицы PB2.

Высоко патогенные вирусы птичьего гриппа A(H5N1) клада 2.3.4.4b, генотипа D1.1, являются причиной широко распространенных вспышек среди птицы и продолжают вызывать спорадические, иногда серьезные, инфекции у людей. В данном исследовании мы охарактеризовали дикий штамм вируса гриппа A(H5N1) D1.1 (BC-H5N1-WT) и его вариант с мутированным нейрамидазом H275Y (BC-H5N1-H275Y), обнаруженные на фермах в Британской Колумбии, Канада, во время вспышки осенью 2024 года. Анализ оценивал кинетику репликации в клетках MDCK, супернатанты собирались на разных днях после инфицирования (p.i.) и титровались с помощью TCID и qRT-PCR. Чувствительность к ингибиторам нейроминидазы была определена с помощью проб ингибирования NA, в то время как чувствительность к балкилавирной кислоте оценивалась с использованием теста на снижение бляшек. Вирулентность оценивалась у мышей BALB/c, инфицированных сериями 10-кратных разводнений каждого вируса для мониторинга потерь веса и смертности. Вирусные титры в легких, мозге, носу, почках, селезенке и сердце были количественно оценены на 4-й день p.i. Вирус BC-H5N1-WT был чувствителен ко всем четырем протестированным противовирусным препаратам, в то время как BC-H5N1-H275Y проявил устойчивость к осельтамивиру и перамивиру, но остался чувствителен к занамивиру и балкилавирной кислоте. Вирус BC-H5N1-WT продемонстрировал значительно более высокие титры вирусной репликации, чем BC-H5N1-H275Y на всех протестированных временных точках и показал большие размеры бляшек. У мышей вирус BC-H5N1-WT был более вирулентным с LD50 значениями 1.78 × 10 PFUs по сравнению с 8.71 × 10 PFUs для BC-H5N1-H275Y, и производил более высокие вирусные титры в легких и других органах. Несмотря на сниженные фитнес-показатели устойчивого варианта H5N1 D1.1, его возникновение в отсутствие вирусного селекционного давления подчеркивает необходимость продолжающегося мониторинга.

Туберкулез (ТБ), вызванный (), остается серьезной глобальной проблемой общественного здравоохранения. Растущее количество доказательств указывает на то, что микробные сообщества слизистых оболочек могут отражать или модулировать реакции хозяев во время инфекции. Тем не менее, оральный микробиом у пациентов с ТБ с различной бактериальной нагрузкой остается плохо охарактеризованным. Целью этого исследования было изучить изменения в оральных грибковых сообществах среди пациентов, положительных по Xpert, распределенных по нагрузке на основе тестирования Xpert MTB/RIF. В этом проспективном многоцентровом когортном исследовании (май-август 2024 года) были зарегистрированы 278 пациентов с ТБ, положительных по Xpert, в пяти больницах Китая. Участники были распределены на группы с высокой, средней, низкой и очень низкой нагрузкой в зависимости от значений порогового цикла Xpert MTB/RIF. Были собраны парные образцы мокроты и мазков с языка. Оральные грибковые профили были охарактеризованы с помощью секвенирования ITS, после чего последовали таксономический анализ, анализ разнообразия и многовариантное ассоциативное тестирование (MaAsLin 2) для выявления устойчивых биомаркеров. Структура оральных грибковых сообществ значительно различалась в зависимости от уровней нагрузки. Анализ бета-разнообразия выявил различное кластеризирование между группой с очень низкой нагрузкой и более высокими группами нагрузки (высокой, средней, низкой). У пациентов с высокой нагрузкой было увеличено количество экологических таксонов, таких как и , тогда как группы с низкой нагрузкой демонстрировали более высокие об abundansы , и . Примечательно, что анализ MaAsLin 2 подтвердил, что и были независимо связаны с более низкой нагрузкой после корректировки на потенциальные искажения. Анализ нейтральной модели показал, что случайные процессы в значительной степени определяют формирование этих оральных грибковых сообществ. Функциональное предсказание предполагало повышенную аэробную респирацию и активность метаболических ферментов в группах с высокой нагрузкой. Это исследование проанализировало оральный грибковый микробиом, стратифицированный по уровням нагрузки у пациентов, положительных по Xpert, выявив заметные изменения в грибковой композиции и функциональном потенциале. Грибковая дисбиоз и измененная метаболическая способность микробов могут дать представление о взаимодействиях хозяина и микробов при легочном туберкулезе (ЛТ). Эти результаты подчеркивают потенциальную ценность профилирования грибкового микробиома для оценки нагрузки, выходящей за рамки его применения только в диагностике ТБ.

Метилирование ДНК традиционно рассматривается как стабильная эпигенетическая модификация. Однако все больше данных свидетельствует о том, что окислительный и генотоксический стресс могут вызывать изменения метилирования в специфических локусах, которые модифицируют транскрипционные ответы. Вклад такой динамической регуляции в экспрессию сердечных генов при ишемии/реперфузии миокарда (ИРИ) остается до конца непонятным. Это исследование проверило, связаны ли изменения метилирования в области промотора с ремоделированием коннексина 43 (Cx43) при ИРИ. Самцам мышей C57BL/6 был проведен глобальный гипотермический I/R с использованием модели сердца, перфузируемого по Лангендорфу, с предварительной обработкой или без нее с помощью ингибитора ДНК-метилтрансферазы 5-азацитидина (5-Аза, 3 мкг/г массы тела, в/к). Метилирование промотора было проанализировано с помощью BSP и MSP, в то время как обогащение Dnmt1 было оценено с помощью иммуноосаждения хроматина. Экспрессия и локализация Cx43 были изучены с помощью qRT-PCR, вестерн-блоттинга и иммуннофлуоресценции, а также электрофизиологических и гистологических анализов. ИРИ была ассоциирована с повышением уровня Dnmt1 и его обогащением в ядре, что сопровождалось изменениями метилирования в выбранных CpG сайтах в исследуемой области промотора и транскрипционной репрессией. Эти изменения совпали со снижением экспрессии Cx43, изменением субклеточной локализации, нарушением электрической проводимости и повышенной предрасположенностью к аритмиям. Предварительная обработка 5-Аза частично ослабила метилирование промотора и сохранила экспрессию и локализацию Cx43 в процессе последующей ИРИ. Эти результаты поддерживают связь между обогащением Dnmt1, изменением метилирования CpG промотора и ремоделированием Cx43 при реперфузионном стрессе, что предполагает, что метилирование, связанное с эпигенетической регуляцией, может участвовать в транскрипционных реакциях Gja1 при ИРИ. Необходимы дальнейшие временные и геноспецифические валидации, чтобы установить кинетику и причинную специфичность этого пути.

Диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома (DLBCL) является агрессивной формой неходжкинской лимфомы с высоким уровнем рецидивов. Молекулярная характеристика опухолей DLBCL привела к созданию нескольких алгоритмов иммуногистохимии для прогностической стратификации. Среди них классификатор Ханса широко используется для классификации DLBCL на подтипы, похожие на В-клетки гомерального центра (GCB), и не гомерального центра/активированные В-клетки (non-GCB/ABC). Классификатор Ханса в первую очередь оценивает экспрессию белков опухолевых маркеров, однако опухолевое микроокружение (TME) DLBCL включает множество иммунных и стромальных клеток, цитокинов и компонентов внеклеточного матрикса, которые способствуют росту опухоли, уклонению от иммунного ответа и частоте рецидивов. Хотя классификатор Ханса предоставляет практический метод для идентификации подтипов, включение информации о TME может улучшить стратификацию риска и дополнительно уточнить группы пациентов. Здесь мы представляем беспристрастный подход на основе глубокого обучения для извлечения значимых особенностей из TME опухолей DLBCL для автоматизированной обработки и анализа множества изображений когорты пациентов с DLBCL. Наш конвейер количественно описывает ряд характеристик, которые отражают клеточный состав образцов опухолей, морфологию и их пространственную организацию. Мы указываем на изменения в пропорциях нескольких клеточных популяций между опухолями GCB и ABC, включая увеличение пропорций иммунных клеток у ABC и их предпочитаемое взаимодействие с M2-макрофагами. Наш анализ предлагает глубокую характеристику подтипов DLBCL и является примером того, как наш конвейер может быть использован для детального количественного анализа опухоли и её подтипов.

Метастазирование является одним из основных факторов, определяющих неэффективность лечения и смертность при раке щитовидной железы, однако взаимодействие между злокачественной эволюцией и иммунной микросредой остается недостаточно охарактеризованным. Иммунотерапия обещает перспективы, но ее эффективность требует более глубокого понимания опухоль ассоциированной иммунной инвазии и регуляции контрольных точек. В этом исследовании мы создали высокоразрешимую транскриптомную атлас экосистемы рака щитовидной железы, проанализировав 55 005 одноклеточных из парных первичных опухолей и метастазов в лимфатические узлы. Объединив индукцию хромосомной копийной вариации (CNV) с консенсусным неотрицательным матричным факторизациями (cNMF), мы расшифровали внутреннюю гетерогенность злокачественных эпителиальных клеток, выявив различные транскрипционные программы и развитие траекторий, запускающих метастатическую каскаду. Метастатическая ниша показала значительное перепрограммирование иммуносупрессивного ландшафта, отличающегося обогащением FOXP3⁺ регуляторными Т-клетками (Treg), LAMP3⁺ дендритными клетками (DCs) и CCL18⁺ макрофагами M2-подобного типа. Примечательно, что в то время как канонические контрольные точки PD-1 и PD-L1/2 показали минимальное выражение, анализ взаимодействия лиганда и рецептора выявил оси LAG3-LGALS3 как доминирующие пути уклонения от иммунного ответа, которые медиируют взаимодействие между CD8⁺ Т-клетками и опухолевым стромой. В заключение, это исследование всесторонне отображает совместную эволюцию пластичности злокачественных тироцитов и иммуносупрессивной метастатической ниши. Раскрывая специфическую роль LAMP3⁺ DC и идентифицируя LAG3/TIGIT как критические альтернативные контрольные точки, наши выводы ставят под сомнение полезность традиционной блокировки PD-1 в этом контексте и предоставляют надежное молекулярное обоснование для разработки стратегий иммунотерапии нового поколения, адаптированных к раку щитовидной железы. Несмотря на ограничения, связанные с небольшим объемом выборки, эти данные служат основой для дальнейшего изучения метастатического иммунного ландшафта при раке щитовидной железы.

Сезонный грипп вызывает значительную заболеваемость и смертность, причем вирусы гриппа A и B являются причиной большинства госпитализаций и случаев смерти, связанных с гриппом. Вакцинация остается ключевой стратегией профилактики гриппа; однако современные вакцины против сезонного гриппа, основанные на традиционных платформах, обеспечивают непостоянную защиту. Вакцины на основе мРНК могут предложить несколько ключевых преимуществ по сравнению с другими вакцинами, включая гибкость в оптимизации экспрессии антигенов для повышения иммуногенности без необходимости в адъювантах. mRNA-1010 является экспериментальным кандидатом на вакцину против сезонного гриппа, который кодирует гемагглютинины (ГАГ) из вирусов гриппа, рекомендованных ВОЗ. В этом рандомизированном исследовании фазы 2 оценивались безопасность, реактивность и иммуногенность трех составов вакцины mRNA-1010 у здоровых взрослых в возрасте от 18 до 49 лет в США (NCT05868382). Подходящие участники были случайным образом назначены для получения однократной дозы одного из составов mRNA-1010 на нескольких уровнях доз. Основной целью была безопасность и реактивность составов кандидатов на вакцину mRNA-1010 по отношению к вакцинно-совместимым штаммам; вторичные и исследовательские цели включали гуморальную и клеточную иммуногенность в оценочных временных точках соответственно. Двести семьдесят участников получили вакцинацию в рамках исследования с мая по декабрь 2023 года. Все составы вакцины mRNA-1010 хорошо переносились, и никаких проблем с безопасностью не было выявлено; все составы вызывали специфические гуморальные и клеточные иммунные ответы на все оцененные штаммы гриппа, при этом оптимизированные составы демонстрировали более высокие иммунные ответы на штаммы гриппа B по сравнению с оригинальным составом mRNA-1010. Эти результаты, вместе с данными других клинических исследований mRNA-1010, поддерживают продолжение оценки mRNA-1010 для повышения защиты от сезонного гриппа.